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Hofer, A.
SIRT4-Überexpression in nicht-kleinzelligen Lungenkarzinomzellen - Auswirkungen einer SIRT4-Überexpression in nicht-kleinzelligen Lungenkarzinomzellen auf deren Sensibilität gegenüber Cisplatin
Humanmedizin; [ Diplomarbeit ] Graz Medical University; 2017. pp.
[OPEN ACCESS]
FullText
- Authors Med Uni Graz:
- Advisor:
- Hrzenjak Andelko
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- Abstract:
- Einleitung: Lungenkrebs ist in Österreich die häufigste Krebstodesursache bei Männern und mittlerweile die zweithäufigste Krebstodesursache bei Frauen. Achtzig Prozent aller Lungenkarzinome sind nicht-kleinzellige Lungenkarzinome. Die Prognose ist mit einer 5-Jahresüberlebensrate von 15% schlecht. Cisplatin ist das Fundament der Chemotherapie bei NSCLC, ein Problem ist hierbei die Chemotherapieresistenz. Sirtuin 4 (SIRT4) wurde in zahlreichen Studien bereits als Tumorsuppressor nachgewiesen, jüngere Untersuchungen räumen ihm allerdings auch eine Rolle in Chemoresistenzmechanismen ein. SIRT4 inhibiert die Glutaminolyse und hat wichtige Funktionen in der DNA-damage-response (DDR). Ziele: In dieser Arbeit überexprimieren wir SIRT4 in A549/PAR-Zellen (kultivierte Lungenkrebszellen) mittels Transfektion von Plasmid-DNA und untersuchen die Auswirkungen dieser Überexpression auf die Cisplatin-Resistenz. Ergebnisse: Wir zeigten mittels qRT-PCR und Western-Blot, dass die SIRT4Überexpression 24 Stunden nach Transfektion mit 0,5 µg Plasmid-DNA pro Well einer 6-Well-Platte bereits nahezu maximal ist. Auf Basis dieser Ergebnisse zeigten wir im Western-Blot für aktivierte Caspase 3 und 7 und mittels Durchflusszytometrie nach Markierung apoptotischer Zellen, dass in Zellen mit SIRT4Überexpression nach Cisplatin-Behandlung weniger Apoptose nachweisbar ist, als in Leerplasmid-Kontrollen. Colony assays zeigten, dass SIRT4-Überexpression das Kolonienwachstum der Zellen nicht verbessert. Diskussion: Vierundzwanzig Stunden nach Transfektion mit 0,5 µg Plasmid-DNA ist die SIRT4-Überexpression optimal für weitere Versuche. Höhere PlasmidMengen und längere Dauer bis zur Weiterbehandlung erhöhen die SIRT4-Expression nicht mehr, niedrigere Plasmid-Mengen führen zu keiner ausreichenden SIRT4-Überexpression. SIRT4-Überexpression scheint A549-Zellen tatsächlich weniger empfindlich gegenüber Cisplatin-Behandlung zu machen. Das schlechtere Kolonienwachstum in den Colony assays unterstützt die These von der „dualen“ Rolle des SIRT4 als Tumorsuppressor einerseits und als Vermittlerprotein von Chemoresistenz andererseits. Die Aussagekraft unserer Ergebnisse wird durch die geringen Versuchsanzahlen und die hohen notwendigen Cisplatin-Konzentrationen limitiert.