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Gewählte Publikation:
Laska, P.
Herstellung und Charakterisierung von DNA-Konstrukten zur Untersuchung von GIRK-Proteinen in Krebszellen
Humanmedizin; [ Diplomarbeit ] Medical University of Graz; 2014. pp. 146
[OPEN ACCESS]
FullText
- Autor*innen der Med Uni Graz:
- Betreuer*innen:
- Schreibmayer Wolfgang
- Steinecker-Frohnwieser Bibiane
- Altmetrics:
- Abstract:
- Die GIRK-Kanäle gehören zu der Kir-Familie. Die ersten GIRK-Kanäle wurden von Rattenherzen isoliert. Es wurden bei Säugetierzellen insgesamt vier GIRK-Untereinheiten gefunden. Die GIRK-Kanäle spielen eine wichtige Rolle bei der Herzerregbarkeit und der Gehirnfunktion. Es wurde auch die Verbindung der GIRK-Kanäle mit Gesundheit und Krankheiten (wie Mb. Parkinson, Downsyndrom, Ataxien, Sucht, Lungenkrebs, Brustkrebs usw.) von vielen Wissenschaftlern studiert. Ziel dieser Diplomarbeit war die Herstellung der C-terminalen Konstrukte für die vier GIRK1-Splice-Varianten (a, c, d, e) und die anschließende Transfektion von MCF-7-Zellen (eine Brustkrebszell-Linie). Zur Überprüfung der DNA-Sequenzen wurden die neu hergestellten C-terminalen Konstrukte von der Firma MWG Eurofins Operon sequenziert. Mit Ausnahme von pEYFPN1-hG1d waren alle hergestellten C-terminalen Konstrukte zu 100% identisch mit den verglichenen DNA-Sequenzen. Anschließend wurden die hergestellten C-terminalen Konstrukte in die MCF-7-Zellen einmal mit dem Marker X (GpI_CFP) und einmal mit dem Marker Y (Srß_CFP) transfektiert. Die darauffolgenden fluoreszenzmikroskopischen Analysen wurden am CLSM durchgeführt. Die Expression vom pEYFPN1-hG1a und pEYFPN1-hG1e war bei beiden Fluoreszenz-Markern sehr gut zu sehen. Die Expression von pEYFPN1-hG1c mit dem Fluoreszenz-Marker Y (Srß_ECP) war sehr deutlich nachweisbar. Zusammenfassend sei gesagt, dass die C-terminalen Konstrukte von den hG1-Splice-Varianten erfolgreich hergestellt wurden. Die neu hergestellten C-terminalen Konstrukte werden zukünftig weiter in der Forschung bei der Untersuchung von GIRK-Proteinen in Krebszellen am Institut für Biophysik an der Med. Uni Graz Verwendung finden.