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Selected Publication:
Kogler-Voigt, M.
Detektion von seltener Tumorzellen im Peripherblut zur Früherkennung von Tumorrezidiven
[ Dissertation ] Medical University of Graz; 2004. pp.
- Authors Med Uni Graz:
- Advisor:
- Pfragner Roswitha
- Preisegger Karl Heinz
- Altmetrics:
- Abstract:
- Im Mammakarzinom ist nur eine Subpopulation an Tumorzellen in der Lage, Metastasen zu bilden. Anhand von Oberflächenproteinen können diese Tumorzellen charakterisiert und isoliert werden. Eines dieser Zelloberflächenprotein, CD44, ist ein Adhäsionsmolekül, desen Hauptligand Hyaluronat ein Bestandteil der Extrazellulärmatrix ist. CD44 ist in viele biologische Prozesse wie Migration von Zellen, Hämatopoese und Aktivierung von Lymphozyten, aber auch in Migration von Tumorzellen und Metastasierung involviert. Oft lösen sich schon in einem frühen Stadium der Erkrankung Tumorzellen aus dem Primärtumor und werden über Blut- und Lymphsystem in andere Organe gestreut, wo sie Metastasen ausbilden können. Die frühe Detektion dieser disseminierten Tumorzellen im Peripherblut durch immuncytochemischer Identifikation könnte wertvoll für die Bestimmung der Prognose von Brustkrebspatientinnen sein. Das Ziel dieser Studie war, Mammakarzinome hinsichtlich ihrer Expression von CD44s und CD44v6 zu untersuchen und auf diesen Ergebnissen aufbauend, ein Modellsystem für die Anreicherung von Tumorzellen aus Peripherblut mit anschließender immuncytochemischer Identifikation dieser Zellen zu etablieren. Das Gewebe von 7 invasiven Mammakarzinomen mit Lymphknotenmetastasen, von 16 invasiven Mammakarzinomen und von 3 in-situ Karzinomen wurde immunhistochemisch hinsichtlich der Expression von CD44s und CD44v6 untersucht. Anschließend wurde Peripherblut eines gesunden Donors mit definierten Zellzahlen der Mammakarzinomzelllinie Hs 578T, die sowohl CD44s als auch CD44v6 überexprimiert, gespikt. Zwei Methoden zru Anreicherung von Tumorzellen aus Peripherblut, Ficoll-Gradientenzentrifugation mit anschließender Depletion CD45-positiver Blutzellen und OncoQuick-Gradientenzentrifugation, wurden miteinander verglichen. Die Wiederfindungsrate der Tumorzellen liegt bei OncoQuick-Gradientenzentrifugation teilweise deutlich unter den Werten, die mit Ficoll-Gradientenzentrifugation wesentlich mehr Blutzellen depletiert werden. Bei der immuncytochemischen Detektion ware die Tumorzellen sowohl durch die Überexpression von CD44s und CD33v6 als auch durch die Größe und Morphologie eindeutig von den Blutzellen zu unterscheiden. Die Detektion von CD44s zeigte falsch negative Ergebnisse, was durch Maskierung der Bindestellen durch Expression von alternativ gespleißten Exons zustande kommt. Wohl aber könnte sich CD44v6 als vielversprechender Marker zur Detektion von Tumorzellen im Peripherblut erweisen.